Hjem > Nyheder > Indhold

Samlet planlægning af PCR Rensning Laboratorium

Jul 22, 2020

For at undgå krydskontaminering under drift er de vigtigste krav til konstruktion, konstruktion og driftsstyring:


1. Laboratoriekonstruktion og -konstruktion, sikkert arbejdssystem eller sikkerhedsstandardprocedurer skal opfylde kravene i de gældende "Generelle krav til laboratoriebiosikkerhed" GB19489.


2. PCR er opdelt i fire funktionelle områder i henhold til arbejdstrinnene, nemlig reagensopbevarings- og forberedelsesområdet, prøveforberedelsesområdet, forstærkningsområdet og forstærkningsproduktanalyseområdet. Hvis et fluorescerende PCR-instrument i realtid er udstyret, kan forstærknings- og produktanalyseområderne kombineres. Hvert funktionelt område skal være tydeligt afmærket, og udstyr og genstande i forskellige funktionelle områder må ikke blandes.


PCR-laboratoriets luftstrømsretning kan udføres i overensstemmelse med reagensopbevarings- og forberedelsesområdet→prøveforberedelsesområdet→amplifikationsområde→forstærket produktanalyseområde for at forhindre de forstærkede produkter i at trænge ind i det forforstærkede område sammen med luftstrømmen. Det kan udføres på den måde, at lufttrykket reduceres fra reagensopbevarings- og forberedelsesområdet → prøveforberedelsesområdet → forstærkningsområde → forstærkningsproduktanalyseområde. Det kan opnås ved at installere udstødningsventilatorer, udstødningsanordninger med undertryk eller andre gennemførlige metoder.


3. Indtastning af hvert arbejdsområde bør nøje følge en enkelt retning, det vil sige reagensopbevaring og forberedelse område → prøve forberedelse område → forstærkning område → forstærkning produkt analyse område. Der skal anvendes forskellige arbejdsområder (f.eks. forskellige farver). Arbejdstagerne må ikke tage arbejdstøj ud, når de forlader hvert arbejdsområde.


4. Rengøring af laboratoriet bør udføres i retning af reagensopbevarings- og forberedelsesområdet→prøveforberedelsesområde→forstærkningsområde→forstærket produktanalyseområde. Forskellige forsøgsområder bør have deres egne rengøringsmidler for at forhindre krydskontaminering.


5. Når arbejdet er overstået, skal arbejdsområdet rengøres med det samme. Laboratoriebænkens overflade i arbejdsområdet skal kunne modstå desinfektions- og rengøringseffekter fra kemikalier som natriumhypchlorit. Den ultraviolette bestråling på overfladen af laboratoriebænken skal være praktisk og effektiv. Da afstanden og energien af den ultraviolette bestråling er meget kritiske for dekontamineringseffekten, kan der anvendes en bevægelig ultraviolet lampe (254nm bølgelængde), og når arbejdet er afsluttet, kan det justeres til bestråling inden for 60-90cm på forsøgsbordet. Da det forstærkede produkt kun er et par hundrede eller ti basepar (bp), er det ikke følsomt over for UV-skader, så det UV-bestrålede forstærkede fragment skal bestråles i længere tid, helst natten over.


4470e46a8191b41672af5226018ca72f



Reagensopbevarings- og forberedelsesområdet har funktioner: klargøring af lagerreagenser, udlevering af reagenser og fremstilling af forstærkningsreaktionsblandingen samt opbevaring og tilberedning af hjælpematerialer såsom centrifugerør og spidser. Materialer såsom opbevaringsreagenser og hjælpematerialer, der anvendes til præparatet, skal transporteres direkte til reagensopbevarings- og forberedelsesområdet og må ikke passere gennem forstærkningsdetektionsområdet. De positive kontrolmaterialer og kvalitetskontrolmaterialerne i sættet bør ikke opbevares i dette område, men bør opbevares i dette område. Prøvebehandlingsområde.


Funktionen af prøven forberedelse område er: nukleinsyre (RNA, DNA) ekstraktion, opbevaring og tilsætning til forstærkning reaktion rør. For operationer, der omfatter kliniske prøver, bør kravene til beskyttelsesudstyr, personlig beskyttelse og driftsspecifikationer for sekundære biosikkerhedslaboratorier være opfyldt. Da forurening med aerosoler kan forekomme under prøveblanding og nukleinsyrerensning, kan der i dette område etableres betingelser for overtryk for at undgå aerosolforurening fra tilstødende områder. For at undgå krydskontaminering mellem prøverne skal det reaktionsrør, der indeholder reaktionsblandingen, dækkes efter tilsætning af den nukleinsyre, der skal testes. For potentielt infektiøse materialer skal låget åbnes i det biologiske sikkerhedsskab, og der skal være klare procedurer for håndtering og inaktivering af prøver.


Forstærkningszonens funktion er: DNA-syntese, DNA-forstærkning og detektion. For at undgå forurening forårsaget af aerosoler, bør gå i området minimeres. Det skal bemærkes, at alle testede reaktionsrør ikke må åbnes i dette område.


Funktionen af det forstærkede produktanalyseområde er: yderligere analyse og bestemmelse af forstærkede fragmenter, såsom hybridisering, enzymfordøjelse elektroforese, denaturering højtydende væskeanalyse, sekventering osv. Nukleinsyre forstærkning produkter har forskellige analysemetoder, såsom sonde hybridisering metoder på membraner eller på mikroplader eller chips (radionuklid mærkning eller ikke-radioaktivnukleid mærkning), direkte eller fordøjet agarose gelphoresis, Polyacrylamid gel elektroforese, sydlige overførsel, nukleinsyre sekventering metoder, massespektrometri, osv.


Analyseområdet for forstærkningsproduktet er den vigtigste kilde til kontaminering af produkter i PCR-laboratoriet, så man skal være opmærksom på at undgå at bære forstærkningsproduktet ud gennem artiklerne og arbejdstøjet i dette område. Når PCR-ELISA-metoden anvendes til påvisning af forstærkede produkter, skal der anvendes en pladevasker til vask af pladerne, og affaldsvæsken skal opsamles i 1 mol/L HCL og kan ikke hældes i laboratoriet, men skal kasseres væk fra PCR-laboratoriet. Drop. Den brugte spids skal også lægges i blød i 1 mol/L HCL og derefter anbringes i en affaldssæk til bortskaffelse i henhold til procedurer, f.eks. Da der i dette område kan anvendes visse genetiske mutationer og giftige stoffer såsom ethidiumbromid, acrylamid, formaldehyd eller radionuklider osv., bør der tages hensyn til forsøgsfolks sikkerhedsbeskyttelse.